AFM原子力显微镜不同生物样品制样方法的介绍

 新闻资讯     |      2023-08-31 09:21:42

原子力显微镜不同生物样品制样方法:

蛋白质、DNA和活细胞是比较有代表性的生物样品,想要把这些样品牢固地固定在基底表面上,需要一定的技巧。测生物样品一般选用云母作为基底云母本身是层状结构,每揭一层都是原子级平整的新鲜表面。所以处理起来比较简单。云母表面带负电荷,可以拿云母直接吸附带正电荷的样品,蛋白质、DNA往往利用静电相互作用来进行固定。

原子力显微镜.jpg

1蛋白质制样:蛋白质是一个两性分子,调节pH值在等电点附近,蛋白质正负电荷相等,分子呈电中性,降低pH时蛋白质呈正电。因此对于蛋白质来说可以调节溶液pH值低于等电点,使样品直接吸附在云母表面去做成像和力学研究。

2 DNA制样DNA成像和蛋白质类似,DNA带负电荷,云母表面也带负电。一种方法可以在溶液中加入正离子,正离子会先吸附在表面上,DNA再吸附在正离子上;另一种方法是用硅烷化试剂把云母表面修饰成氨基结尾,这样云母表面带正电就可以吸附DNA分子。

3、活细胞制样:活细胞比较大,从光学显微镜下就可以预先判断样品是否适合做AFM原子力显微镜。细胞制样一般推荐覆盖率50%~70%,贴壁生长,吸得比较牢固,这是非常理想的。如果覆盖率低,细胞是圆的没有贴壁,或者是死的一碰就移动。有的可能覆盖率尚可但表面的细胞可能是死的 已经脱离表面。还有的是太密了,有可能是好几层,*下层是贴壁了,但上层的贴不牢,这些都不是理想的样品。

细胞制样

如果细胞不容易贴壁 我们可以借助其他物质来帮助细胞吸附在表面上如用聚赖氨酸,胶原蛋白,纤粘蛋白,层黏连蛋白修饰基底,从而提高细胞与其底的粘附力。