原子力显微镜作为一种重要的单分子研究工具,在教学、科研领域的研究中得到了广泛应用。目前主要以测量普通样品的形貌为主,因为生物样品十分“娇贵”,制样方法比较繁琐。
今天,小编跟大家分享几种常见生物样品测试AFM原子力显微镜的制样方法。
原子力显微镜制样原则
AFM原子力显微镜的制样原则是要把待测样品固定在干净的其底上,如果样品表面很脏污染物不仅会污染探针,同时还会干扰成像结果。如果下针后样品是移动的也是没办法完成成像的,所以无论是空气中还是液下成像,制样需要满足上述两个条件即干净+固定。
液下成像,Z简单的方法是直接在样品表面滴一滴液体,如晶体表面或者比较小的样品。另一种方法是需要将样品整个浸泡在液体中,如细胞测样时,B须将细胞种在培养皿中。浸泡的时候需注意,液体高度不能高于保护套高度,这是很重要的一点。如果要把样品粘在大的基底上,需要注意所用的胶不能是水溶性的。
不同生物样品制样方法
蛋白质、DNA和活细胞是比较有代表性的生物样品,想要把这些样品牢固地固定在基底表面上,需要一定的技巧。测生物样品一般选用云母作为基底云母本身是层状结构,每揭一层都是原子级平整的新鲜表面。所以处理起来比较简单。云母表面带负电荷,可以拿云母直接吸附带正电荷的样品,蛋白质、DNA往往利用静电相互作用来进行固定。
1.蛋白质制样:蛋白质是一个两性分子,调节pH值在等电点附近,蛋白质正负电荷相等,分子呈电中性,降低pH时蛋白质呈正电。因此对于蛋白质来说可以调节溶液pH值低于等电点,使样品直接吸附在云母表面去做成像和力学研究。
2. DNA制样:DNA成像和蛋白质类似,DNA带负电荷,云母表面也带负电。D一种方法可以在溶液中加入正离子,正离子会先吸附在表面上,DNA再吸附在正离子上;另一种方法是用硅烷化试剂把云母表面修饰成氨基结尾,这样云母表面带正电就可以吸附DNA分子。
3. 活细胞制样:活细胞比较大,从光学显微镜下就可以预先判断样品是否适合做。细胞制样一般推荐覆盖率50%~70%,贴壁生长,吸得比较牢固,这是非常理想的。如果覆盖率低,细胞是圆的没有贴壁,或者是死的一碰就移动。有的可能覆盖率尚可但表面的细胞可能是死的 已经脱离表面。还有的是太密了,有可能是好几层,Z下层是贴壁了,但上层的贴不牢,这些都不是理想的样品。
细胞制样
如果细胞不容易贴壁 我们可以借助其他物质来帮助细胞吸附在表面上如用聚赖氨酸,胶原蛋白,纤粘蛋白,层黏连蛋白修饰基底,从而提高细胞与其底的粘附力。